上海通蔚生物科技有限公司如何提高改良ELISA的靈敏度
提高改良ELISA的靈敏度可以通過(guò)優(yōu)化封閉液、包被過(guò)夜洗滌次數(shù)、調(diào)整稀釋液配方、優(yōu)化反應(yīng)模式、選擇合適的抗體濃度、調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件等方法。
1. 優(yōu)化封閉液
封閉液一般選用小牛血清、BSA、脫脂蛋白等,條件為37℃2小時(shí)以上。
2. 優(yōu)化包被過(guò)夜洗滌次數(shù)
包被過(guò)夜洗滌不應(yīng)多于2遍。
3. 調(diào)整稀釋液配方
調(diào)整稀釋液配方可能會(huì)有好的結(jié)果。
4. 優(yōu)化反應(yīng)模式
間接法的反應(yīng)模式經(jīng)典的是30/30/15。
5. 選擇合適的抗體濃度
有些抗體的濃度很高,在ELISA時(shí)要做系列濃度摸索。因?yàn)樵谀愕膶?shí)驗(yàn)中,抗原濃度是未知的,因此,可如下:取一固定抗原濃度(要低一點(diǎn),如100ug/ml),而把抗體濃度做不同濃度稀釋,如:1:10000,1:20000,1:30000等。然后ELISA,找出能檢測(cè)到抗原明顯反應(yīng)的抗體濃度,即為適包被抗體濃度。
6. 調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件
可以嘗試調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件,例如包被時(shí)間、調(diào)整濃度、增加洗脫次數(shù)、增加撫育時(shí)間等。
以上方法可以幫助您提高改良ELISA的靈敏度。需要注意的是,不同的實(shí)驗(yàn)條件可能需要不同的優(yōu)化策略,因此建議您根據(jù)具體情況選擇合適的方法。
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